Eliminación de huevos de los pequeños estróngilos en la materia fecal de los equinos y su importancia práctica en la posibilidad de tratamientos selectivos / Fecal shedding of equine small strongyle eggs and its practical importance for selective treatment

Resumen Los pequeños estróngilos son los parásitos de mayor prevalencia e importancia en los equinos de todo el mundo, y el desarrollo generalizado de la resistencia de estos nematodos a los antihelmínticos está impulsando la aplicación de tratamientos selectivos (TS) para disminuir o demorar el desarrollo de estos fenómenos. Esta estrategia se basa en conteos de huevos de nematodos en la materia fecal de todos los integrantes del grupo animal para tratar solamente aquellos que sobrepasan un determinado umbral o cut off. Este principio de TS se ve favorecido por la consistencia de los conteos de huevos por gramo de heces (hpg) en los equinos y está siendo empleada en algunos países del hemisferio norte, especialmente en los animales adultos. En la Argentina, existe una ausencia de información básica en relación a las condiciones climáticas, de pastoreo y manejo que podrían resultar en cargas parasitarias y transmisión de nematodos diferentes a las observadas en el hemisferio norte. En este contexto, el objetivo de este estudio fue caracterizar la eliminación de huevos de pequeños estróngilos en 436 equinos de diferentes edades pertenecientes a 19 establecimientos del área central de la Argentina. El 90% de los equinos mostró huevos de estróngilos en las heces y los valores de hpg fueron menores a 200 y mayores a 1.000 en el 32% y 22% de los equinos respectivamente. La distribución de los huevos de estróngilos entre individuos de todas las edades fue sobre-dispersa o agregada, con una media aritmética general de 671,59 ± 789,76 y un valor de k o parámetro de agregación inversa de 0,72 (distribución de la binomial negativa). La edad de los animales (potrillos vs adultos) y los biotipos (deportivo vs trabajo) en la categoría adultos influenciaron la magnitud de los valores del hpg (p<0,001). En esta última categoría el 35% de los animales fue responsable de la excreción de aproximadamente el 80% de los huevos eliminados en las pasturas. Si bien existen algunas diferencias con lo observado en países del hemisferio norte con poblaciones parasitarias más agregadas o sobre-dispersas, los TS para el control de los pequeños estróngilos en equinos adultos podrían también ser una estrategia válida bajo nuestras condiciones para disminuir la presión de selección sobre el genoma parasitario y permitir el desarrollo de poblaciones en refugio.

Abstract Small strongyles are the most prevalent and important parasites in grazing horses throughout the world and the widespread development of antihelminthic resistance has prompted in some countries of the northern hemisphere the application of selective treatments (ST) to reduce or delay the development of these phenomena. This strategy is based on determining strongyle fecal egg counts of all herd members and treating only those exceeding a certain threshold or cut off. However, there is an absence of basic information on horses maintained under climatic, grazing or management conditions different from those observed in the northern hemisphere. In this context, the aim of this study was to characterize the elimination of eggs of small strongyles in horses of different ages from 19 farms in the central area of Argentina. Out of a total of 436 horses, 90% showed positive strongyles egg counts and in these animals the count of eggs per gram of feces (epg) was under 200 and over 1,000 in 32% and 22% of the horses respectively. The distribution of strongyle eggs among individuals of all categories was over-dispersed or aggregated with a general epg arithmetic mean of 671.59 ± 789.76 and a value of the inverse aggregation parameter of 0.72 (negative binomial distribution). The age of the animals (foals vs. adults) and the biotypes in the adult category (sports vs. work) influenced the magnitude of the epg values (P <0.001). In the latter category, approximately 35% of the animals were responsible for the excretion of approximately 80% of the eggs in the pastures. Although some differences on magnitude and distribution of strongyle fecal egg counts were observed in countries of the northern hemisphere, ST of small strongyles in adult equines could also be a valid strategy under Argentinian conditions to reduce the selection pressure on the parasitic genome and allow the development of refugia populations.

Resistencia antihelmíntica en equinos: Observaciones sobre el período de reaparición de huevos luego del tratamiento con ivermectina en potrancas y yeguas madres

En los equinos parasitados por los pequeños estróngilos, un menor período requerido luego del tratamiento con antihelmínticos para la reaparición de huevos (PRH) de los nematodes en la materia fecal, puede ser utilizado como un indicador de la presencia de resistencia o pérdida de eficacia a estas drogas. En el presente trabajo se evaluó la eficacia clínica y el PRH luego de tratamientos con ivermectina (0,2 mgr/kg) en equinos adultos (yeguas madres) y jóvenes (potrancas) naturalmente parasitados por pequeños estróngilos en un establecimiento de la provincia de Tucumán. La eficacia clínica determinada en la segunda semana post-tratamiento y utilizando un test de reducción en el conteo de huevos, osciló entre el 99,8 y el 100% en yeguas y potrancas respectivamente. Por su parte el PRH (considerado como el período post- tratamiento en que se alcanza el 10% del hpg pre-tratamiento o una reducción del mismo < 90%) fue de seis y siete semanas para las potrancas y yeguas madres respectivamente (p=0,001). En la sexta semana post- tratamiento, las potrancas mostraron poseer 11,74 veces más riesgo (IC 95% = 2,58-53,38) de reaparición de huevos que las yeguas madres. Estas diferencias ocasionadas por la edad de los animales deberían considerarse cuando se realizan estudios para establecer el status de susceptibilidad o resistencia a los antihelmínticos basados en el PRH para evitar asunciones incorrectas sobre el mismo.

In horses parasitized by small strongyles, a shortened strongyle egg reappearance period (ERP) after treatment with anthelmintics is considered an early indicator of the presence of resistance or loss of efficacy to these drugs. In the present work, clinical efficacy and ERP were evaluated after treatments with ivermectin in adult horses (broodmares) and juveniles (its fillies) naturally parasitized by small strongyles in an farm of Tucumán province. The clinical efficacy determined in the second week after treatment, and using a test of reduction in the egg count, ranged between 99.8 and 100% in mares and fillies respectively. The ERP (considered as the post- treatment period in which 10% of the pre-treatment epg was reached or a reduction of it < 90%) was six and seven weeks for the fillies and mother mares respectively (p= 0.001). In the sixth week after treatment, the fillies showed 11.74 times more risk (95% CI = 2.58-53.38) of reappearance of eggs than the brood mares. These differences caused by the age of the animals should be considered when conducting studies to establish the status of susceptibility or resistance to anthelmintics based on the ERP to avoid incorrect assumptions.

Pequeños estróngilos de los equinos: Eficacia clínica y periodo de reaparición de huevos luego del tratamiento con moxidectina y pirantel

El control de los pequeños estróngilos de los equinos (grupo Ciatostoma) se basa casi exclusivamente en la aplicación de antihelmínticos. En nuestro país, el desarrollo de resistencia generalizada a los bencimidazoles, está limitando las alternativas químicas disponibles a las lactonas macrocíclicas (ivermectina y moxidectina) y al pirantel, consideradas como drogas de larga y corta acción respectivamente. La información actualizada sobre la actividad de estas drogas en el campo es crítica para determinar su eficacia y detectar el desarrollo de fenómenos de resistencia a los antihelmínticos. En los equinos el período de reaparición de huevos (PRH) luego del tratamiento es considerado como un indicador temprano de la presencia de resistencia. En el presente trabajo se evaluó la eficacia clínica y el PRH luego de tratamientos con moxidectina y pirantel en equinos adultos de cinco establecimientos de las provincias de Santa Fe y Córdoba naturalmente parasitados por pequeños estróngilos. La eficacia clínica determinada al día 15 pos tratamiento utilizando un test de reducción en el conteo de huevos, osciló entre el 99,8 y el 100% para la moxidectina y entre el 98,9 y el 98,8% para el pirantel. Por su parte en el presente estudio el PRH fue de al menos 100 días para la moxidectina y de 35 días para el pirantel. Estos resultados indican que ambas drogas se muestran activas para el control de estos nematodes y que las poblaciones estudiadas (alguna de ellas resistentes a bencimidazoles) permanecen actualmente susceptibles a la moxidectina así como al pirantel. Esta última droga es de uso limitado en nuestro país, pero su inclusión en los programas de control contra los pequeños estróngilos podría reducir la dependencia y la presión de selección sobre las lactonas macrocíclicas y contribuir a mantener la vida útil de las mismas.

The control of the small strongyles (Ciathostoma group) in horses is based on the application of anthelmintics. In our country, the development of generalized resistance to benzimidazoles is limiting the chemical alternatives available to macrocyclic lactones (ivermectin and moxidectin) and to pyrantel, considered as long-acting and short-acting drugs respectively. Updated information on the activity of these drugs in the field, is critical for determining its efficacy and detecting the development of anthelmintic resistance. In these horse nematodes the period of egg reappearance (ERP) after treatment is considered as an early indicator of the presence of resistance. The present study evaluated the clinical efficacy and ERP after moxidectin and pirantel treatments in adult horses naturally parasitized by small strongyles from five farms from Santa Fe and Córdoba provinces. Clinical efficacy determined at day 14 or 15 post treatment using a test of reduction in the egg count ranged from 98.9 to 98.8% for the pirantel and 99.8 to 100% for moxidectin. The ERP was at least 100 days for moxidectin and 35 days for the pirantel. These results indicate that both drugs are active for the control of these nematodes and that the populations studied (some of them resistant to benzimidazoles) remain currently susceptible to moxidectin as well as to pyrantel. This last drug is of limited use in Argentina, but its inclusion in the control programs against the small strongyls could reduce the dependence and the selection pressure on the macrocyclic lactones and contribute to maintain the useful life of the same ones.

Eficacia del monepantel para el control de aislamientos de Haemonchus contortus y Trichostrongylus spp. con resistencia múltiple (ivermectina y febendazole) en caprinos

El monepantel es un nuevo antihelmíntico registrado en nuestro país exclusivamente para el control de los nematodes gastrointestinales de los ovinos y su uso ha sido direccionado mayormente hacia el control de parásitos resistentes a las clases de antihelmínticos disponibles actualmente. Estos mismos nematodes también parasitan a los caprinos, pero en estos rumiantes la patofisiología y la respuesta a los antihelmínticos es diferente, lo cual resulta en un mayor parasitismo y complejidad en el manejo de la resistencia. La presente comunicación informa sobre la eficacia del monepantel en dos hatos caprinos mantenidos bajo condiciones de campo y parasitados naturalmente por los géneros de nematodes gastrointestinales más comunes del área central de la Argentina (Haemonchus y Trichostrongylus) y portando alelos de resistencia múltiple (ivermectina y febendazole). El test de reducción en el conteo de huevos post tratamiento comparando diversas fórmulas, indicaron que en todos los hatos el monepantel por vía oral y a la dosis de 3,75 mg/kg de peso (1,5 veces mayor a la dosis ovina), resultó en eficacias del 99% al 100 %. Se realizan breves consideraciones sobre el uso potencial de esta droga en caprinos.

Monepantel is a new anthelmintic registered in Argentina exclusively for control of gastrointestinal nematodes of sheep and mostly directed toward controlling resistant parasites to current available classes of anthelmintics. The same nematodes also parasitize goats but pathophysiology and response are different in these hosts resulting in more severe parasitism and complexity in handling anthelmintic resistance. This report assess the efficacy of monepantel in goats maintained under field conditions and naturally parasitized by most common gastrointestinal nematodes from central Argentina (Haemonchus and Trichostrongylus) carrying alleles of multiple resistance (ivermectin and febendazole). According to the egg count reduction test, efficacies of 99% to 100% were observed after monepantel treatment at 3.75 mg/kg orally (1.5 ovine dose).

What can digital transcript profiling reveal about human cancers?

Important biological and clinical features of malignancy are reflected in its transcript pattern. Recent advances in gene expression technology and informatics have provided a powerful new means to obtain and interpret these expression patterns. A comprehensive approach to expression profiling is serial analysis of gene expression (SAGE), which provides digital information on transcript levels. SAGE works by counting transcripts and storing these digital values electronically, providing absolute gene expression levels that make historical comparisons possible. SAGE produces a comprehensive profile of gene expression and can be used to search for candidate tumor markers or antigens in a limited number of samples. The Cancer Genome Anatomy Project has created a SAGE database of human gene expression levels for many different tumors and normal reference tissues and provides online tools for viewing, comparing, and downloading expression profiles. Digital expression profiling using SAGE and informatics have been useful for identifying genes that have a role in tumor invasion and other aspects of tumor progression

TRAP-silver staining, a highly sensitive assay for measuring telomerase activity in tumor tissue and cell lines

Measurement of telomerase activity in clinically obtained tumor samples may provide important information for use as both a diagnostic marker and a prognostic indicator for patient outcome. In order to evaluate telomerase activity in tumor tissue without radiolabeling the product, we developed a simple telomeric repeat amplification protocol-silver-staining assay that is less time-consuming, is safe and requires minimal equipment. In addition, we determined the sensitivity of the silver-staining method by using extracts of telomerase-positive thyroid carcinoma cell lines which were serially diluted from 5,000 to 10 cells. Telomerase activity was also assayed in 19 thyroid tumors, 2 normal controls and 27 bone marrow aspirates. The results indicate that the technique permits the detection of telomerase activity from 5000 to as few as 10 cells. We propose that it could be immediately applicable in many laboratories due to the minimal amount of equipment required